Monitoramento da infecção pelo HIV-1: material de biorrepositório como fonte alternativa para a cultura e isolamento viral e estudo de sua evolução

Resumo

A cultura do vírus da imunodeficiência humana (HIV) foi, no início da epidemia de aids, a primeira forma de diagnóstico. Com o desenvolvimento da sorologia e, posteriormente, dos testes moleculares, sua utilização para esse fim foi descontinuada. A produção de isolados virais, tanto para entender a dinâmica in vitro da infecção quanto para a obtenção de produtos a partir deles, é ainda uma área importante de pesquisa. No caso da produção de vírus para fins de produção de vacinas, a origem do isolado viral e as eventuais modificações durante o período de cultura podem ter impacto na avaliação de respostas. Neste estudo procuramos: i) reestabelecer os protocolos de isolamento viral; ii) avaliar o impacto desse cultivo na evolução genética in vitro; iii) avaliar o uso de materiais biológicos, entre os quais plasma e anel leucocitário, obtidos com anticoagulante EDTA e criopreservados na coleta, como alternativas ao método usual de isolamento a partir de células mononucleares de sangue periférico em heparina; e iv) testar alternativas mais simples de detecção do antígeno (Ag) viral no sobrenadante dessas culturas. Foram usados protocolos modificados WHO de cocultura utilizando meio de cultura RPMI, interleucina-2, soro fetal bovino, com adaptações para isolamento de outros materiais. A detecção do vírus no sobrenadante foi feita pela quantificação de carga viral, dosagem de Ag p24 (ELISA) e por detecção de Ag p24 por teste rápido. Um total de 26 amostras de 15 pacientes foi submetido à cultura. Foi realizado o sequenciamento
parcial do gene env (Sanger) da (...AU)