Caracterização de genes de resistência antimicrobiana e seu contexto genético em Klebsiella spp. produtoras de KPC isoladas de hospitais do Estado de São Paulo

Resumo

Klebsiella pneumoniae produtoras de ESBL estão frequentemente envolvidas em infecções relacionadas
à assistência à saúde (IRAS). ESBL são capazes de hidrolisar todas as penicilinas, cefalosporinas
de amplo espectro e aztreonam, sendo os carbapenêmicos o fármaco de escolha para infecções por
microrganismos produtores de ESBL. Porém, Klebsiella spp. produtoras de carbapenemases tem se
tornado cada vez mais frequentes. Além disso, já foi descrita, no Brasil, K. pneumoniae produtoras da 16S
RMTase, RmtD, uma enzima que confere resistência em nível elevado para todos os aminoglicosídeos,
tornando as opções terapêuticas bastante limitadas. O objetivo desse trabalho foi caracterizar genes
de resistência responsáveis pela produção de ESBL, carbapenemases e 16S RMTases e seu contexto
genético em Klebsiella spp. produtoras de KPC isoladas de amostras clínicas provenientes de hospitais
do Estado de São Paulo. Cem cepas de Klebsiella spp., isoladas de 2009 a 2011, previamente confirmadas
como produtoras de KPC, foram submetidas a PCR para detecção de blaSHV, blaTEM, blaCTX-M,
blaCTX-M-15, blaCTX-M-2, blaCTX-M-8, blaGES-1, blaVIM, blaIMP, blaSPM, blaNDM, blaOXA48, armA, rmtA, rmtB rmtC e rmtD e sequenciamento de DNA. Para as cepas negativas para os
genes blaSHV foram realizadas a identificação de Klebsiella spp.a partir de provas bioquímicas, PCR
Multiplex para detecção dos genes blaSHV, blaLEN e blaOKP e sequenciamento dos genes 16S rRNA
e rpoB. Experimentos de transformação e clonagem foram utilizados para a identificação de um novo
gene de resistência aos aminoglicosídeos e plasmídeos carreadores de genes de 16S RMTases foram
sequenciados. As cepas apresentaram resistência em nível elevado para a maioria dos antibióticos
testados. Em relação aos genes de resistência, 80% das cepas foram positivas para os genes blaCTX-M
(61 CTXM-15, 7 CTX-M-2, 7 CTX-M-8 e 1 CTX-M-35). Duas cepas eram coprodutoras de CTX-M-2
e CTX-M-15 e 2 co-produtoras de CTX-M-59 e CTXM-8. A presença do gene blaTEM-1 ocorreu em
26%. Os genes blaSHV foram observados em 97% dos isolados (89 SHV-11, 1 SHV-1, 3 SHV-110 e
4 SHV-12). Todas as cepas foram caracterizadas como produtoras de KPC-2. Das 3 cepas negativas
para o blaSHV, 2 foram confirmadas como K. quasipneumoniae subsp. similipneumoniae e 1 como K.
variicola. Em relação aos genes de 16S RMTases, 3 cepas apresentaram-se positivas para RmtD. Uma
nova 16S RMTase, presente em 4 cepas, foi caracterizada e denominada RmtG. O sequenciamento
dos plasmídeos contendo os genes de 16S RMTases mostrou associação com elementos móveis como
ISCR2 e IS26. A identificação de mecanismos de resistência é uma ferramenta útil para determinar a
epidemiologia dos genes de resistência produzidos por Klebsiella spp. resistentes a diversas classes de
antimicrobianos, o que pode colaborar para a implantação de medidas efetivas no âmbito hospitalar para
conter a disseminação desses microrganismos.