Estimativa do número mínimo de promastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis necessário para a proliferação em sistema de cultivo em microplacas
Palavras-chave:
Microcultivo, L. (V.) braziliensis, Proliferação in vitro, Leishmania, Diagnóstico parasitológicoResumo
O diagnóstico de certeza da leishmaniose cutânea depende do encontro doagente etiológico. A técnica tradicional de cultura (TTC) realizada em tubosdemanda prolongada incubação, grande volume de meio de cultivo e deamostra. A técnica de microcultura (TMC) realizada em placas de 96 poçosutiliza pequeno volume de meio de cultivo e de amostra, possibilitandorealizar diversos inóculos por amostra examinada. O crescimento de L. (V.) braziliensis (MHOM/84/LTB300) foi realizado nas duas técnicasobjetivando determinar o número mínimo de parasitas necessários para aproliferação. A partir de diluições seriadas de suspensão com L. (V.) braziliensis, foram obtidos inóculos em concentrações de 1x100 até 1x103 para o cultivo. Na concentração de 1x103 foi observada proliferação0arasitária a partir de 48 horas do cultivo. Um único parasita (1x100) foisuficiente para permitir a proliferação nas duas técnicas. No inóculo de18concentração 1x101 a TTC atingiu 1x108 parasitas, porém a proliferação foi3observada primeiramente na TMC. Na concentração de 1x103 a TMC atingiu 2x108 parasitas. Concluiu-se que a TMC é uma estratégia que permitiu ocultivo a partir de uma única forma flagelada. Novos estudos estão sendorealizados para avaliar a viabilidade da TMC na utilização como métododiagnóstico.
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Referências
Neuber H. Leishmaniasis. J. Dtsch Dermatol Ges. 2008;6(9):754-65.
Gállego M. Zoonosis emergentes por patógenos parásitos: las leishmaniosis. Rev Sci Tech Off Int Epiz. 2004; 23(2):661-76.
Oumeish OY. Cutaneous leishmaniasis: a historical perspective. Clin dermatol. 1999;17:249-54.
Desjeux P. Leishmaniasis: current situation and new perspectives. Comp Immunol Microbiol. Infect Dis. 2004;27:305-18.
Bates PA, Tetley L. Leishmania mexicana: induction of metacyclogenesis by cultivation of promastigotes at acidic pH. Experimental Parasitology. 1993; 76:412-23.
Ministério da Saúde. Manual de vigilância da leishmaniose tegumentar americana. Brasília; 2007. p.21.
Garcia AS. Alternativas nutricionais para o crescimento primário in vitro e para a identificação de protozoários do gênero Leishmania [dissertação de mestrado]. São Paulo: Coordenadoria do Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo; 2007.
Degrave W, Fernandes O, Campbell D, Bozza M, Lopes U. Use of molecular probes and PCR for detection and typing of Leishmania – a mini review. Mem do Inst Oswaldo Cruz. 1994;89(3):463-9.
Prata A, Silva LA. Calazar. In: Coura JR. Dinâmica das doenças infecciosas e parasitárias. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 2005. V. 1, p. 713-32.
Reithinger R, Dujardin JC, Louzir H, Pirmez C, Alexander B, Brooker S. Cutaneous leishmaniasis. Lancet Infect Dis. 2007;7(9):581–96.
Murray HW, Berman JD, Davies CR, Saravia NG. Advances in leishmaniasis. Lancet. 2005;366:1561-77.
Singh S. New developments in diagnosis of leishmaniasis. Indian J Med Res. 2006;123:311-30.
Andresen K, Gaafar A, El-Hasan A, Ismail A, Dafaila M, Theander TG, et al. Evaluation of the polymerase chain reaction in the diagnosis of cutaneous leishmaniasis due to Leishmania major. A comparison with direct microscopy of smears and section from lesions. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1996;90:133-5
Schuster FL, Sullivan JJ. Cultivation of clinically significant hemoflagellates. Clin Microbiol Rev. 2002;15(3):374-89.
Boggild AK, Miranda-Verastegui C, Espinosa D, Arevalo J, Adaui V, Tulliano G, et al. Evaluation of a microculture method for isolation of Leishmania parasites from cutaneous lesions of patients in Peru. J Clin Microbiol. 2007;45(11):3680-84.
Gutierres A, Tolezano LFC, Garcia EL, Westphalen EVN, Westphalen SR, Araújo MFL, Barbosa JER, Aureliano DP, Taniguchi HH, Cunha EA, Garcia RA, Hiramoto RM, Tolezano JE. A microculture technique for growing trypanosomatids parasites of leishmaniasis and chagas´disease. Preliminary results. VII Encontro do Instituto Adolfo Lutz; outubro de 2007; São Paulo.
Hide M, Singh R, Kumar B, Banuls AL, Sundar S. A microculture technique for isolating live Leishmania parasites from peripheral blood of visceral leishmaniasis patients. Acta Trop. 2007;102:197-200.
Maia C, Ramada J, Cristóvão J, Gonçalves L, Campino L. Diagnosis of canine leishmaniasis: conventional and molecular techniques using different tissues. Vet J. 2009;179:142-4.
Lightner LK, Chulay JD, Bryceson ADM. Comparison of microscopy and culture in the detection of Leishmania donovani from splenic aspirates. Am J Trop Med Hyg. 1983; 32(2):296-9.
Allahverdiyev AM, Uzun S, Bagirova M, Durdu M, Memisoglu HR. A sensitive new microculture method for diagnosis of cutaneous leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg. 2004;70(3):294-7.
Allahverdiyev AM, Bagirova M, Uzun S, Alabaz D, Aksaray N, Kocabas E, et al. The value of a new microculture method for diagnosis of visceral leishmaniasis by using bone marrow and peripheral blood. Am J Trop Med Hyg. 2005; 73(2):276-80.
Maia C, Campino L. Methods for diagnosis of canine leishmaniasis and immune response to infection. Vet Parasitol. 2008;158(4):274-87.
Oliveira MA, Pires AS, Bastos RP, Lima GM, Pinto SA, Pereira LI, et al. Leishmania spp. parasite isolation through inoculation of patient biopsy macerates in interferon gamma knockout mice. Rev Inst Med Trop São Paulo. 2010;52(2):83-8.
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