Infecção de células BHK-21 cultivadas em monocamadas estacionárias por cepas de vírus PV e CVS
Palavras-chave:
Vírus da raiva, Cepas PV e CVS, Células BHK-21, ReplicaçãoResumo
O vírus da raiva pode estar presente em diferentes tecidos e órgãos, tornando possível a sua replicação em diversos tipos de culturas celulares. Considerando a fundamental importância da produção desse vírus in vitro para a realização de testes diagnósticos, produção de soros hiperimunes e pesquisas, o objetivo deste estudo foi avaliar a infecção viral das cepas PV (Pasteur Virus) e CVS (Challenge Virus Standard) em linhagem de células BHK-21 (Baby Hamster Kidney). As células foram infectadas com as cepas PV e CVS e cultivadas em frascos estacionários de cultivo celular e em microplacas com lamínulas, a 37ºC por até 96 horas. A cada três horas foram coletadas alíquotas do sobrenadante dos frascos, para acompanhamento da concentração das partículas virais, e lamínulas para avaliar a infecção viral nas células. As avaliações foram realizadas por imunofluorescência direta, para definição da maior diluição em que as suspensões virais infectaram 100% da monocamada confluente de células BHK-21 e para avaliar o aumento da intensidade de fluorescência, expressa em cruzes (+ a ++++), identificando o antígeno viral, demonstrado por fotodocumentação. A presença de partículas virais foi observada a partir de nove horas pós-infecção, em ambas as cepas. As partículas virais das cepas PV e CVS no sobrenadante foram obtidas a partir de 15 e 18 horas de incubação, respectivamente, sendo observada a maior concentração de partículas nas suspensões virais das duas cepas, 72 horas pós-infecção. Portanto, o protocolo usado demonstrou eficiência, independente da cepa empregada, permitindo a obtenção de bons títulos nas suspensões virais produzidas.
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