Resumo
A padronização e validação de um ensaio multiplex requer a combinação de parâmetros importantes, como sensibilidade e especificidade, níveis aceitáveis de desempenho, robustez e reprodutibilidade. Este trabalho padronizou um Dot-blot multiparamétrico visando a triagem sorológica da paracoccidioidomicose, histoplasmose e aspergilose. Foram avaliadas 148 amostras de soro: 10 de indivíduos saudáveis, 36 de pacientes com paracoccidioidomicose, 62 de pacientes com histoplasmose e 40 de pacientes com aspergilose. Verificou-se que o Dot-blot multiparamétrico apresentou elevado percentual de reatividade cruzada. Entretanto, quando avaliado individualmente, na triagem sorológica da histoplasmose observou-se bom desempenho quando comparado ao ensaio de imunodifusão dupla, considerado o teste padrão ouro, com 100% de co-positividade e 83,3% de co- negatividade. O desempenho da triagem sorológica da aspergilose não foi satisfatório quando comparado a imunodifusão dupla, apresentando 71,4% de co-positividade e 100% de co-negatividade. A avaliação da estabilidade das membranas de nitrocelulose mostrou que membranas sensibilizadas com antígeno de H. capsulatum permaneceram estáveis por 90 dias e as sensibilizadas com antígeno de A. fumigatus, por 30 dias. Concluímos que o uso de antígenos brutos não foi adequado para a padronização do ensaio de Dot-blot multiparamétrico, devido ao
alto índice de reatividade cruzada, e que novos testes devem ser realizados com proteínas purificadas.
Referências
1. Bongomin F, Gago S, Oladele RO, Denning DW. Global and multi-national prevalence of fungal diseases – estimate precision. J Fungi. 2017;3(4):57. https://doi.org/10.3390/jof3040057
2. Silva-Ferreira C, de Castro Ribeiro EM, Miranda Goes AD, Mello Silva BD. Current strategies for diagnosis of paracoccidioidomycosis and prospects of methods based on gold nanoparticles. Future Microbiol. 2016;11:973-85. https://doi.org/10.2217/fmb-2016-0062
3. Almeida-Silva F, Gonçalves D, Abreu Almeida M, Guimarães AJ. Current aspects of diagnosis and therapeutics of histoplasmosis and future trends: moving onto a new immune (diagnosis and therapeutic) era? Curr Clin Micro Rpt. 2019;6:98-107. https://doi.org/10.1007/s40588-019-00118-3
4. Alvarado P, Pérez-Rojas Y, Zambrano EA, Gonzatti MI, Roschman-González A. Improved serodiagnosis of histoplasmosis by use of deglycosylated extracellular released antigens of Histoplasma capsulatum. J Microbiol Methods. 2020;175:105981. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2020.105981
5. Latgé JP, Chamilos G. Aspergillus fumigatus and aspergillosis in 2019. Clin Microbiol Rev. 2019;33(1):e00140-18. https://doi.org/10.1128/CMR.00140-18
6. Volpe Chaves CE, do Valle Leone de Oliveira SM, Venturini J, Grande AJ, Silvestre TF, Poncio Mendes R et al. Accuracy of serological tests for diagnosis of chronic pulmonary aspergillosis: a systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2020;15(3):e0222738. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0222738
7. da Silva JF, de Oliveira HC, Marcos CM, Assato PA, Fusco-Almeida AM, Mendes-Giannini MJS. Advances and challenges in paracoccidioidomycosis serology caused by Paracoccidioides species complex: an update. Diagn Microbiol Infect Dis. 2016;84(1):87-94. https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2015.06.004
8. Pappas MG. Recent applications of the Dot-ELISA in immunoparasitology. Vet Parasitol. 1988;29(2-3):105-29. https://doi.org/10.1016/0304-4017(88)90120-3
9. Taborda CP Camargo ZP. Diagnosis of paracoccidioidomycosis by Dot immunobinding assay for antibody detection using the purified and specific antigen gp43. J Clin Microbiol. 1994;32(2):554-6. https://doi.org/10.1128/jcm.32.2.554-556.1994
10. Martins R, Marques S, Alves M, Fecchio D, de Franco MF. Serological follow-up of patients with paracoccidioidomycosis treated with itraconazole using Dot-blot, ELISA and Western-blot. Rev Inst Med Trop São Paulo. 1997;39(5):261-9. https://doi.org/10.1590/s0036-46651997000500004
11. Carvalho KC, Vallejo MC, Camargo ZP, Puccia R. Use of recombinant gp43 isoforms expressed in Pichia pastoris for diagnosis of paracoccidioidomycosis. Clin Vaccine Immunol. 2008;15(4):622-9. https://doi.org/10.1128/CVI.00437-07
12. Assunção TRS. Desenvolvimento de método para diagnóstico da paracoccidioidomicose humana utilizando antígeno recombinante de Paracoccidioides brasiliensis. [dissertação de mestrado]. Londrina (PR): Universidade Estadual de Londrina; 2012.
13. Kamikawa, CM, Mendes RP, Vicentini AP. Standardization and validation of Dot-ELISA assay for Paracoccidioides brasiliensis antibody detection. J Venom Anim Toxins Incl Trop Dis. 2017;23:11. https://doi.org/10.1186/s40409-017-0101-3
14. Shahid M, Malik A, Bhargava R. Prevalence of aspergillosis in chronic lung diseases. Indian J Med Microbiol. 2001;19(4):201-5.
15. Malik A, Shahid M, Bhargava R. Prevalence of aspergillosis in bronchogenic carcinoma. Indian J Pathol Microbiol. 2003;46(3):507-10.
16. Shahid M, Malik A, Bhargava R. Bronchogenic carcinoma and secondary aspergillosis common yet unexplored: evaluation of the role of bronchoalveolar lavage-polymerase chain reaction and some nonvalidated serologic methods to establish early diagnosis. Cancer. 2008;113(3):547-58. https://doi.org/10.1002/cncr.23570
17. Silva DF. Análise da estabilidade de exoantígenos de Paracoccidioides brasiliensis [dissertação de mestrado]. São Paulo (SP): Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde; 2005.
18. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72(1-2):248-254. https://doi.org/10.1006/abio.1976.9999
19. Freitas RS. Caracterização fenotípica e padronização de antígenos de H. capsulatum var. capsulatum para o diagnóstico da histoplasmose. [dissertação de mestrado]. São Paulo (SP): Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde; 2005.
20. Freitas RS, Kamikawa CM, Vicentini AP. Fast protocol for the production of Histoplasma capsulatum antigens for antibody detection in the immunodiagnosis of histoplasmosis. Rev Iberoam Micol. 2018:35(1):27-31. https://doi.org/10.1016/j.riam.2017.04.004
21. Kamikawa CM. Padronização da metodologia de Dot-blot para o diagnóstico rápido da paracoccidioidomicose. [dissertação de mestrado]. São Paulo (SP): Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde; 2014.
22. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gels. Acta Path Microbiol Scand. 1949;26(4):507-15. https://doi.org/10.1111/j.1699-0463.1949.tb00751.x
23. Gorocica P, Taylor ML, Alvarado-Vásquez N, Pérez-Torres A, Lascurain R, Zenteno E. The interaction between Histoplasma capsulatum cell wall carbohydrates and host components: relevance in the immunomodulatory role of histoplasmosis. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2009;104(3):492-6. https://doi.org/10.1590/s0074-02762009000300016
24. Gow NAR, Latge JP, Munro CA. The fungal cell wall: structure, biosynthesis, and function. Microbiol Spectr. 2017;5(3). https://doi.org/10.1128/microbiolspec.FUNK-0035-2016
25. Garcia-Rubio R, de Oliveira HC, Rivera J, Trevijano-Contador N. The fungal cell wall: candida, Cryptococcus, and Aspergillus species. Front Microbiol. 2020;10:2993. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.02993
26. Connolly PA, Durkin MM, Lemonte AM, Hackett EJ, Wheat LJ. Detection of histoplasma antigen by a quantitative enzyme immunoassay. Clin Vaccine Immunol. 2007;14(12):1587-91. https://doi.org/10.1128/CVI.00071-07
27. Sato H, Honigman AS, Scalarone GM. Development of a comparative Dot-ELISA for the detection of antibodies in blastomycosis. Diagn Microbiol Infect Dis. 1987;7(1):37-43. https://doi.org/10.1016/0732-8893(87)90067-8
28. Mendes-Giannini MJ, Camargo ME, Lacaz CS, Ferreira AW. Immunoenzymatic absorption test for serodiagnosis of paracoccidioidomycosis. J Clin Microbiol. 1984;20(1):103-8. https://doi.org/10.1128/jcm.20.1.103-108.1984
29. Sylvestre TF, Silva LRF, Cavalcante RS, Moris DV, Venturini J, Vicentini AP et al. Prevalence and serological diagnosis of relapse in paracoccidioidomycosis patients. PLoS Negl Trop Dis. 2014;8(5):e2834. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002834
30. Beraldo KR. Comparação do perfil antigênico de Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii para o imunodiagnóstico da paracoccidioidomicose. [dissertação de mestrado]. São Paulo (SP): Coordenadoria de Controle de Doenças da Secretaria de Estado da Saúde; 2018.
31. Buccheri R, Morais VS, Kamikawa CM, Vidal MSM, Naves G, Del Negro GMB et al. Case report: misleading serological diagnosis of paracoccidioidomycosis in a young patient with the acute form disease: Paracoccidioides brasiliensis or Paracoccidioides lutzii?. Am J Trop Med Hyg. 2018;98(4):1082-85. https://doi.org/10.4269/ajtmh.17-0812
32. Salazar F, Brown GD. Antifungal innate immunity: a perspective from the last 10 years. J Innate Immun. 2018;10(5-6):373-97. https://doi.org/10.1159/000488539
33. Peron G, Fernandes FF, Landgraf TN, Martinez R, Panunto-Castelo A. Recombinant 60-kDa heat shock protein from Paracoccidioides brasiliensis: is it a good antigen for serological diagnosis of paracoccidioidomycosis? Braz J Med Biol Res. 2017;50(4):e5928. https://doi.org/10.1590/1414-431X20175928
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