Resumen
Fibrose cística é uma doença genética grave, de herança autossômica recessiva e caracterizada por uma alteração nas secreções das glândulas exócrinas de todo o organismo, resultando principalmente em doença pulmonar obstrutiva crônica progressiva. Pacientes portadores de fibrose cística são frequentemente acometidos por infecções pulmonares causadas por microrganismos específicos. Pseudomonas aeruginosa é o microrganismo mais prevalente, e coloniza cerca de 70% dos pacientes adolescentes e adultos. Os danos ao pulmão aumentam quando P. aeruginosa adquire o fenótipo mucóide. Resistência bacteriana também tem aumentado, sendo relatada a emergência da resistência aos carbapenêmicos. Alguns centros de fibrose cística relatam disseminação de P. aeruginosa entre os pacientes e outros centros relatam grande variabilidade entre os isolados e não identificam transmissão entre os pacientes, o que pode indicar a aquisição ambiental ao invés de uma fonte comum. Este estudo buscou avaliar a sensibilidade aos antimicrobianos frente a P. aeruginosa isoladas do trato respiratório de pacientes com fibrose cística atendidos no Ambulatório do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP) e analisar a variabilidade genética entre os diversos isolados bacterianos de vários pacientes. Um total de 580 isolados de Pseudomonas aeruginosa foram obtidos de 98 pacientes em três períodos de coleta diferentes, destes, 129 isolados de 11 pacientes foram selecionados e analisados. Os isolados foram submetidos ao teste de disco-difusão frente a 14 antimicrobianos. Os isolados que apresentaram resistência ao imipenem foram submetidos à pesquisa fenotípica de metalo-beta-lactamase e pesquisa genotípica para carbapenemases blaSPM, blaIMP, blaVIM e blaNDM, blaKPC e blaGES. O isolado 420-2 com perfil fenotípico suspeito de produção de ESBL foi submetido à pesquisa genotípica dos genes blaCTX-M, blaGES e blaTEM. Os isolados que apresentaram resistência à amicacina foram submetidos a pesquisa fenotípica de metilases 16S rRNA e pesquisa genotípica para rmtD e rmtG. O perfil de sensibilidade e o perfil de restrição apresentou variabilidade. Foram encontrados 35 perfis de restrição diferentes em 11 pacientes, sendo que somente um paciente apresentou um único perfil de restrição, os outros tinham ao menos dois perfis de restrição. Alguns isolados apresentaram 100% de sensibilidade, outros apresentaram resistência somente a um antimicrobiano e ainda houve aqueles que apresentaram resistência a mais de um antimicrobiano, porém não houve isolados com 100% de resistência frente aos antimicrobianos testados. Foram evidenciados fenotipicamente isolados com suspeita de produção de MBL e isolados com suspeita de produção de metilases 16S rRNA. PCRs utilizando primers específicos para blaSPM, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaKPC, blaGES e rmtD obtiveram resultados negativos. Sete isolados que apresentaram alto nível de resistência aos aminoglicosídeos foram confirmados por PCR e sequenciamento de DNA como produtores de RmtG, uma nova metilase 16S rRNA, recentemente descrita. PCRs para a detecção de ESBL foram negativos. Os perfis de restrição e os perfis de sensibilidade não apresentaram relação direta, uma vez que perfis de restrição diferentes apresentaram perfis de sensibilidade iguais, e perfis de restrição idênticos apresentaram perfis de sensibilidade diferentes. A partir dos resultados obtidos pela análise genotípica foi demonstrada a diversidade genética de P. aeruginosa e dois pacientes apresentaram o mesmo perfil de restrição de PFGE. Diversos pacientes permaneceram colonizados pelo mesmo clone ao longo do tempo.
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Derechos de autor 2016 Sandra Terezinha Rodrigues Nora, Doroti de Oliveira Garcia (orientadora)
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