Diversidade genética de Pseudomonas aeruginosa isoladas do trato respiratório de pacientes com fibrose cística

Resumo

 Fibrose cística é uma doença genética grave, de herança autossômica recessiva e caracterizada por uma     alteração nas secreções das glândulas exócrinas de todo o organismo, resultando principalmente em doença     pulmonar obstrutiva crônica progressiva. Pacientes portadores de fibrose cística são frequentemente     acometidos por infecções pulmonares causadas por microrganismos específicos. Pseudomonas     aeruginosa é o microrganismo mais prevalente, e coloniza cerca de 70% dos pacientes adolescentes e     adultos. Os danos ao pulmão aumentam quando P. aeruginosa adquire o fenótipo mucóide. Resistência     bacteriana também tem aumentado, sendo relatada a emergência da resistência aos carbapenêmicos.     Alguns centros de fibrose cística relatam disseminação de P. aeruginosa entre os pacientes e outros     centros relatam grande variabilidade entre os isolados e não identificam transmissão entre os pacientes,     o que pode indicar a aquisição ambiental ao invés de uma fonte comum. Este estudo buscou avaliar a     sensibilidade aos antimicrobianos frente a P. aeruginosa isoladas do trato respiratório de pacientes com     fibrose cística atendidos no Ambulatório do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade     de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP) e analisar a variabilidade genética entre os     diversos isolados bacterianos de vários pacientes. Um total de 580 isolados de Pseudomonas aeruginosa     foram obtidos de 98 pacientes em três períodos de coleta diferentes, destes, 129 isolados de 11 pacientes     foram selecionados e analisados. Os isolados foram submetidos ao teste de disco-difusão frente a 14     antimicrobianos. Os isolados que apresentaram resistência ao imipenem foram submetidos à pesquisa     fenotípica de metalo-beta-lactamase e pesquisa genotípica para carbapenemases blaSPM, blaIMP,     blaVIM e blaNDM, blaKPC e blaGES. O isolado 420-2 com perfil fenotípico suspeito de produção de     ESBL foi submetido à pesquisa genotípica dos genes blaCTX-M, blaGES e blaTEM. Os isolados que     apresentaram resistência à amicacina foram submetidos a pesquisa fenotípica de metilases 16S rRNA     e pesquisa genotípica para rmtD e rmtG. O perfil de sensibilidade e o perfil de restrição apresentou     variabilidade. Foram encontrados 35 perfis de restrição diferentes em 11 pacientes, sendo que somente     um paciente apresentou um único perfil de restrição, os outros tinham ao menos dois perfis de restrição.     Alguns isolados apresentaram 100% de sensibilidade, outros apresentaram resistência somente a um     antimicrobiano e ainda houve aqueles que apresentaram resistência a mais de um antimicrobiano, porém     não houve isolados com 100% de resistência frente aos antimicrobianos testados. Foram evidenciados     fenotipicamente isolados com suspeita de produção de MBL e isolados com suspeita de produção de     metilases 16S rRNA. PCRs utilizando primers específicos para blaSPM, blaIMP, blaVIM, blaNDM,     blaKPC, blaGES e rmtD obtiveram resultados negativos. Sete isolados que apresentaram alto nível     de resistência aos aminoglicosídeos foram confirmados por PCR e sequenciamento de DNA como     produtores de RmtG, uma nova metilase 16S rRNA, recentemente descrita. PCRs para a detecção de     ESBL foram negativos. Os perfis de restrição e os perfis de sensibilidade não apresentaram relação     direta, uma vez que perfis de restrição diferentes apresentaram perfis de sensibilidade iguais, e perfis de     restrição idênticos apresentaram perfis de sensibilidade diferentes. A partir dos resultados obtidos pela     análise genotípica foi demonstrada a diversidade genética de P. aeruginosa e dois pacientes apresentaram     o mesmo perfil de restrição de PFGE. Diversos pacientes permaneceram colonizados pelo mesmo clone     ao longo do tempo.