Método modificado para detecção de oocistos de Cryptosporidium utilizando DNA extraído de amostras ambientais

Resumo

O protozoário parasito Cryptosporidium tem emergido como um dos mais importantes contaminantes da água, causando surtos de diarreia de veiculação hídrica em todo mundo. Para avaliar o significado, para a saúde pública, da presença desse agente patogênico em amostras ambientais, vários métodos têm sido desenvolvidos para isolar e detectar oocistos de Cryptosporidium. No presente estudo foi padronizado um método confiável e reprodutível para detectar e identificar oocistos de Cryptosporidium em amostras de água no Estado de São Paulo, Brasil, como o primeiro passo para futuros estudos de genotipagem. Amostras de água foram concentradas por filtração, submetidas a ultrasom em solução de Tween 80 a 0.1%; o sedimento obtido foi transferido para microtubos contendo 1,0 ml de água destilada e conservado a -20ºC. O DNA foi extraído com adição de 1% de PVP no tampão de lise; a extração foi realizada em tubo Phase Lock Gel Heavy®. Houve amplificação do fragmento esperado de 214 bp em cinco das 11 amostras de água analisadas. Os resultados deste estudo demonstraram a utilidade de aplicação do teste padronizado em estudos epidemiológicos e em programas de vigilância, em virtude da técnica ter apresentado sensibilidade para incrementar significativamente a quantidade de produto amplificado.