Palavras-chave
condrócito
cultura celular
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Resumo
O objetivo deste trabalho foi padronizar a metodologia para obtenção de cultura primária de condrócitos de cartilagem hialina articular humana para sua utilização em transplante autólogo. Foram selecionados cinco pacientes do Instituto de Ortopedia e Traumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (IOT-HC-FMUSP) sem doença degenerativa articular, com indicação de cirurgia artroscópica para correção de afecção do ligamento cruzado anterior do joelho. Os fragmentos de cartilagem articular pesando aproximadamente 300-500 mg foram colocados em placas de Petri contendo meio de Eagle modificado por Dulbecco´s (DMEM) com 40µg/ml de gentamicina. Cada fragmento foi cortado e colocado em 2mg/ml de colagenase diluída em meio DMEM com 10% de soro fetal bovino (SFB). As células foram isoladas e cultivadas em frasco de cultura T25 em meio DMEM suplementado com 10% de SFB. As células aderiram ao frasco de cultura após 24 h e após o 3° dia de cultivo as células apresentavam morfologia elipsóide e estrelada. As culturas foram fixadas e coradas intensamente com azul de toluidina sugerindo que as células iniciaram a síntese de uma nova matriz extracellular. A curva de crescimento mostrou que a razão de crescimento foi em torno do segundo e terceiro...
Referências
1. Aulthouse, A. et al. Expression of the human condrocyte phenotype in vitro. Vitro Cell. Dev. Biol., 25:659-68,1989.
2. Archer, W.C. et al. Phenotypic modulation in sub-populations of human articular chondrocytes in vitro. J .Cell. Sci, 97: 361-71, 1990.
3. Benya, P.D. et al. The progeny of rabbit articular chondrocytes synthesize collagen types I and III type I trimer, but not type II. Verifications by cyanogens bromide peptide analysis. Biochemistry,16: 865-72,1977.
4. Brittberg, M. et al. Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologus chondrocyte transplantation. N. Engl. J. Med.,331: 889-95, 1994.
5. Folkman, J.; Moscona, A. Role of cell shape in growth control. Nature, 273: 345-9, 1978.
6. Freshney, R.I. Culture of animal cells: a manual of basic techniques. New York, Alam, R. Liss Inc., 1987.
7. Glowacki, J. et al. Cell shape and phenotypic expression in chondrocytes. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 172: 93-8, 1983.
8. Gorti, G.K. et al. Cartilage tissue engineering using cryogenic chondrocytes. Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg., 129 (8): 889-93, 2003
9. Green, W.T. Behavior of articular chondrocytes in cell culture. Clin. Orthop., 75: 248-60, 1971.
10. Green, W.T. Articular Cartilage Repair: Behaviorof rabbit chondrocytes during tissue culture and subssequentallografting. Clin. Orthop., 124: 237-50, 1977.
11. Hascall, V. C.; Hascall G. K. Proteoglycans in Hay, E.D (ed). Cell Biology of extracellular matrix. New York , p. 39-52, 1981.
12. Kuriwaka, M. et al. Optimum combination of monolayer and three-dimensional cultures for cartilage-like tissue engineering. Tissue Eng., 9(1): 41-9, 2003.
13. Mandl, E.W. et al. Serum free medium supplemted with highconcentration FGF2 for cell expansion culture of human ear chondrocytes promotes redifferentiation capacity. Tissue Eng., 8(4): 573-80, 2002
14. Manning, W. K. et al. Isolation and culture of chondrocytes from human articular cartilage. Arthritis Rheum., 10: 235-93, 1967.
15. Mayne, R.; Burgeson R.E. Collagen types in cartilage. In: Articular Cartilage Biochemistry (Kuettner, Schleyerbach and Hascall)ed. New York, Raven Press, 1987.
16. Van Der Rest, M.; Mayne R. Type IX collagen proteoglycan form cartilage is covalently cross-linked to type II collagen. J. Biol. Chem., 26: 1615-8, 1988.
17. Von Der Mark, K. et al. Relationship between cell shape and type of collagen synthesized as condrocytes lose their cartilage phenotype in culture. Nature, 267: 531-2, 1977.
18. Watt, F. M. Effect of seeding density on stability of the differentiated phenotype of pig articular chondrocytes in culture. J. Cell. Sci., 89: 373-8, 1988.
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Copyright (c) 2003 Fabio T. Kitadai, Cristina A. Figueiredo, Suely P. Curti, Luis Eugênio G. Leme, Clara D. R. Carelli, Marco M. Amatuzzi