Pesquisa de sítios de restrição enzimática em segmento da ORF K1 do genoma de herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) em isolados clínicos de São Paulo: relação com subtipos virais e implantação da técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism Analy

Resumo

A epidemia da Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (AIDS)
fez aumentar a incidência de sarcoma de Kaposi (SK) em todos
os países e o SK passou a ser considerado doença definidora
de AIDS. Desde a descoberta de seu agente etiológico, o
herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8), vários estudos vêm sendo
realizados com o objetivo de caracterizar subtipos virais
presentes em todas as formas de SK: clássica, endêmica,
iatrogênica e epidêmica. Os sistemas rotineiramente usados na
subtipagem do HHV-8 têm usado o seqüenciamento de um gene
que contém regiões hipervariáveis e que codifica uma
glicoproteína de membrana viral (ORF K1). O presente trabalho
apresenta um sistema de subtipagem alternativo que se baseia
na presença de sítios de restrição enzimática em um pequeno
segmento do gene ORF K1, região hipervariável 1 (VR1) e que
permite discriminar subtipos virais. A análise de 68 seqüências;
50 que pertenciam a 36 pacientes com sarcoma de Kaposi
infectados e não infectados pelo HIV-1 de São Paulo e 18 a
protótipos dos subtipos A a E, mostraram mapas de restrição
enzimática característicos dos principais subtipos virais descritos
até o momento. Tomando como base apenas as enzimas
disponíveis comercialmente, foram selecionadas cinco que se
mostraram úteis para a subtipagem de HHV-8: Taq I, Nsi I, Hinf
I, Hae III e Mse I. Os resultados obtidos com a técnica de PCRRFLP (reação em cadeia de polimerase associada à análise do
polimorfismo de fragmentos de restrição enzimática) mostraram
que de 48 espécimes brasileiros previamente classificados como
sendo dos subtipos A, B e C por seqüenciamento gênico, todos
foram corretamente subtipados pela técnica de PCR-RFLP. Três
amostras (duas do subtipo A e uma do B) apresentaram mais um
sítio de restrição enzimática além dos descritos como sendo os
predominantes. Mais recentemente, outras 27 amostras de 18
casos de infecção por HHV-8 foram subtipadas pela PCR-RFLP.
Houve detecção de oito isolados do subtipo A, sendo seis de
variante predominante, um de variante minoritária conhecida e
um de nova variante viral. Dois casos de infecção por HHV-8 do
subtipo B e sete do subtipo C também foram identificados.
Finalmente, um provável caso de infecção pelo subtipo E foi
encontrado em paciente com SK-AIDS disseminado, resistente
à quimioterapia. Na avaliação global, houve maior número de
casos de infecção por HHV-8 dos subtipos A e C. Concluindo,
devido à alta sensibilidade e especificidade, baixo custo, rapidez
e facilidade de execução, a técnica de PCR-RFLP pode ser usada
em larga escala para estudos de epidemiologia molecular,
principalmente em países em desenvolvimento.