Detecção e tipagem de vírus Dengue sorotipos 1 e 2 por multiplex RT-PCR

Resumo

Os vírus Dengue são arbovírus da família Flaviviridae, com 4 sorotipos antigenicamente distintos. Variações genéticas intraespecíficas entre os mesmos sorotipos, inclusive em uma mesma epidemia, estão bem estabelecidas. O desenvolvimento da técnica de polimerização em cadeia (PC R) é uma alternativa na identificação dos vírus Dengue. Neste estudo construímos dois novos pares de primers para os sorotipos 1 e 2, sem a ajuda de programas de computador. Foram utilizadas como modelo as seqüências genômicas de DEN-1 (Western Pacific), Nauru Island e DEN-2 New Guinea C. Os primers sense 5' ACA AAA AGT GGA GAC CTG GGC TC 3' (D1S) e complementar 5' GTC TAT TCC AAG TCT CTT GGG 3' (DIA) correspondem respectivamente às posições 769 a 791 e 1607 a 1587 do genoma do vírus DEN-l. Estas seqüências reconhecem parte das regiões de membrana (M) e proteína estrutural (E) do genoma do sorotipos 1 e contem 838 pares de bases. A seqüência de primers de DEN-2 foi 5' TGA AGG GGA CGG TTC TCC ATG T 3' (D2S) homólogos aos nucleotídios 1838 a 1859 e 5' GAC TCC CAC CAA TAC TAG TGA CAC 3' (D2A) correspondendo às posições 2312 a 2288. O produto da amplificação foi de 474 pares de bases correspondendo a uma porção do genoma responsável pela síntese da proteína E. A especificidade dos primers foi avaliada por multiplex RT-PCR.