UTILIZAÇÃO DA TÉCNICA MALDI-TOF NA IDENTIFICAÇÃO DE LEVEDURAS – A EXPERIÊNCIA DO NÚCLEO DE MICOLOGIA DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ - SP

Resumo

Espectrometria de massa com dessorção a laser e análise de tempo de vôo é conhecida como MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry). Trata-se de metodologia aplicável para identificação de bactérias e fungos. Objetivo: comparar os resultados do equipamento MALDI Biotyper 3.0 (Bruker Daltonics) com os dos métodos fenotípicos e/ou genotípicos utilizados na identificação de leveduras. Material e métodos: 82 cepas de leveduras foram processadas com protocolo de extração em tubo proposto pelo fabricante. As amostras foram aplicadas em triplicata e no controle de qualidade foi utilizado E. coli, fornecido pelo fabricante. Critérios de leitura do equipamento: espectro ? 2,0 indica excelente identificação de espécie; ?1,7 ?2,0 identificação não confiável; ?1,7 não identificada. Resultados: Foram analisadas: 14 C. parapsilosis stricto sensu, 12 C. gattii, 8 C. metapsilosis, 7 C. guilliermondii, 6 (C. neoformans e C. tropicalis), 5 C. orthopsilosis, 4 C. albicans, 3 Pichia anomala, 2 (C. glabrata, C. norvegensis e C. inconspicua), 1 (C. dubliniensis, S. cerevisiae, C. lypolitica, C. unigutulatus, C. famata, C. kefyr, C. rugosa, C. lusitaniae, M. pachydermatis, T. asahii e cepa misturada). Dessas, 74,4% (61/82) apresentaram espectro ? 2,0; 23,2% (19/82) espectro ?1,7 ?2,0 e apenas 2,4% (2/82) espectro ?1,7, portanto, não foram identificadas (T. asahii e C. inconspicua). Discussão: Nos espectros ? 2,0 e ?1,7 ? 2,0, houve discordância de 9,8% (6/61) e 5,2% (1/19), respectivamente. Para avaliar os resultados temos que levar em conta que: as discordâncias ocorreram apenas nas cepas identificadas fenotipicamente; a metodologia não distingue mistura de cepas e; banco de dados não contempla a espécie. Trata-se de método rápido, cujo tempo de processamento e leitura de 96 amostras é de aproximadamente 3h. O banco de dados é aberto o que permite a inclusão de novas espécies. A rapidez de leitura é a grande vantagem desta metodologia em relação a outros métodos fenotípicos.