AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE DE DIFERENTES MARCAS DE ENZIMA TAQ DNA POLIMERASE EMPREGADAS NA ROTINA DIAGNÓSTICA

Abstract

Introdução: A reação em cadeia de polimerase (PCR) é uma técnica amplamente usada para detectar sequências específicas de DNA com a finalidade de identificação de agentes, diagnostico clínico e pesquisa básica. O Setor de Micobactérias do Instituto Adolfo Lutz – Central, utiliza a PCR PRA-hsp65 como método de identificação de micobactérias em associação ao método bioquímico em sua rotina. Diversas marcas de reagentes disponíveis no mercado foram utilizadas e testadas na rotina do laboratório. Objetivo: Este trabalho teve como objetivo avaliar as diferentes marcas de Taq DNA Polimerase (Taq) adquiridas pelo Setor de Micobacterias, por processo de compras via pregão (cotação pelo menor preço), com diferentes concentrações de glicerol (5%, 10%, e 12%). Material e métodos: Foram utilizados DNA de duas cepas de micobactérias e um controle negativo para testar quatro marcas diferentes de Taq (A, B, C e D). Após a reação da PCR, a amplificação foi visualizada em eletroforese com gel de agarose em fotodocumentador. Resultados: Somente na concentração de 5% de glicerol houve amplificação com a marca A. As marcas B e D tiveram amplificação satisfatória em todos os testes. Não ocorreu amplificação com a marca C. Concluímos que algumas marcas da Taq adquiridas pelo processo de compra, apresentaram resultados insatisfatórios, observamos que a qualidade do produto é imprescindível para a realização da PCR, pois cada enzima é fabricada a partir da DNA polimerase de um organismo diferente. Essas diferenças afetam na atividade da enzima e sua aplicação, o que torna importante a solicitação de uma amostra do produto que está sendo cotado e testa-lo na rotina. A qualidade do reagente interfere no resultado do exame e na sua confiabilidade.