AVALIAÇÃO DO USO DA PCR EM TEMPO REAL PARA A IDENTIFICAÇÃO DOS GENOGRUPOS DE NEISSERIA MENINGITIDIS EM AMOSTRAS CLÍNICAS

Abstract

Neisseria meningitidis (Men) é o principal agente causador de meningite bacteriana, sendo responsável por 4.018 casos notificados no país no ano de 2008. O meningococo é classificado em 12 sorogrupos, baseados nas diferenças imunoquímicas e antigênicas de seus polissacarídeos capsulares. Cinco sorogrupos (A, B, C, W135 e Y) são prevalentes e sua identificação tem sido realizada por meio de testes de soroaglutinação ou por técnicas moleculares. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o uso da técnica de PCR em tempo real (RT-PCR) para a identificação dos genogrupos A, B, C, W135 e Y diretamente em amostras clínicas. As reações de RT-PCR foram realizadas em formato “single”, empregando-se iniciadores e sondas TaqMan® específicas para os genes sacB (genogrupo A), siaD (genogrupos B ou C), synF (genogrupo W135) e synG (genogrupo Y). As 5 reações de RT-PCR foram testadas em amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) e/ou soro de pacientes provenientes do município de São Paulo no período de junho de 2007 a junho de 2009. Foram somente analisadas amostras previamente positivas para o gene ctrA de Men por RT-PCR. Entre as 286 amostras de LCR analisadas, 78% foram positivas para MenC, 12% para MenB, 7% para MenW135, 1% para MenY e 2% foram negativas pelas 5 reações (não-genogrupável). Entre as 112 amostras de soro, 68% foram  positivas para MenC, 5% para MenB, 5% para MenW135 e 22% foram não-genogrupável. Os dados de nosso estudo revelaram que: (a) o percentual de amostras não-genogrupáveis foi maior em amostras de soro (22%) comparativamente ao LCR (2%); (b) o genogrupo C foi o prevalente (73%) entre as amostras analisadas; (iii) a técnica de RT-PCR pode ser empregada para a determinação rápida dos genogrupos de N. meningitidis diretamente de amostras clínicas.