PRODUÇÃO DE ANTÍGENOS DE Toxoplasma gondii, EM CÉLULAS VERO DESENVOLVIDAS SEM SORO FETAL BOVINO

Abstract

O diagnóstico da toxoplasmose é principalmente baseado em detecção de anticorpos. Os testes mais utilizados são: reação de imunofluorescência indireta, ELISA e Avidez. Antígenos produzidos“in house”,normalmente mantidos em camundongos, apresentam alta especificidade e sensibilidade em relação à kits comerciais.Entretanto, quando grande a demanda de exames necessita-se de biotério e elevado número de camundongos. Logo, a produção antigênica é trabalhosa.Em vista desta problemática o presente estudo visa minimizar e/ou abolir o uso de camundongos para a produção de antígenos anti-T.gondii. Iniciou-se a adaptação dos taquizoítos da cepa RH em culturas de células VERO (ATCC- CCL-81) mantidas em meio livre de soro (VPM SFM AGT, Gibco- Invitrogem). Foi calculada a concentração ótima de parasitas por número de células (MOI) através da relação do nºde parasitas/nºde células. A relação foi de 2, ou seja, a partir de subcultivos de 1,5x106 células o número ideal de taquizoítos foi de 3x106 .A seguir realizaram-se 10 passagens seriadas dos parasitas nas culturas. Como controle, durante o período da 10 à 100 passagem, 2 grupos de camundongos foram infectados com taquizoítos provenientes de camundongos-G1 e das passagens em cultura-G2. Cada grupo foi subdividido em 2 com infecções 104 e 105 parasitas (3 animais/sub-grupo). Nenhuma alteração foi constatada na produtividade de parasitas no decorrer das infecções em todos os grupos, gerando infecções de 106 à 107 taquizoítos/ml. Em todas as passagens nas culturas foram coletadas amostras dos parasitas com objetivo de se investigar presença de alteração genética. Após a extração e purificação do DNA, realizou-se a PCR utilizando-se iniciadores que amplificam uma região altamente conservada no genoma de T. gondii (TOX4/TOX5). Os produtos amplificados foram sequenciados e analisados no sitio http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast. Os resultados preliminares demonstram que pelo menos até 10ª passagem não foram observadas alterações na sequência de nucleotídeos, sugerindo que provavelmente, não sofrem alterações genéticas, garantindo a qualidade do antígeno.