RE-CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA, BIOQUÍMICA E MOLECULAR DE AMOSTRAS DO GÊNERO NOCARDIA DA MICOTECA DO IMT-SP

Abstract

Introdução: O gênero Nocardia é gram-positivo, filamentoso, parcialmente álcool-ácido resistente (AAR), cuja filogenia é definida pela seqüência de genes 16S rRNA. A bioquímica e morfologia são inconclusivas, sendo necessária a análise molecular para confirmação de gênero e espécie. Devido ao notável aumento de pacientes imunocomprometidos, de sua longevidade e da recente epidemia da AIDS, este patógeno emerge como importante doença oportunista. O avanço significativo das técnicas moleculares na identificação e diferenciação do gênero Nocardia spp entre os Actinomicetos aeróbicos, levou a uma revolução taxonômica, identificando 36 novas espécies. Objetivo: Padronizar a identificação de 27 amostras de actinomycetes pertencentes à coleção da Micoteca do IMTSP. Metodologia: Avaliação morfológica e bioquímica de 22 isolados do gênero Nocardia e 5 isolados heterólogos, além da identificação molecular, pelo método Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), através da região conservada (16S rDNA), e o gene específico para Nocadia spp hsp65 para definir gênero. Resultados Preliminares: Observamos que houve discordância entre a identificação vigente e os resultados obtidos, tanto na metodologia clássica quanto da molecular. Morfologicamente os isolados de Nocardia apresentaram características parciais de AAR, com presença de hifas aéreas e fragmentadas. Observamos pela bioquímica que 60% de N. asteroides, 100% de N. cavie e 12,5% de N. brasiliensis apresentaram resultados divergentes do esperado. O método molecular demonstrou 100% de reconhecimento da região conservada para bactérias e 95,5% de amplificação da proteína espécie-específica, do gene hsp65. Conclusões preliminares: Para identificação deste gênero o método molecular é mais seguro, rápido e preciso que o método tradicional, no qual se observou sensibilidade elevada, entretanto houve reconhecimento, do gene hsp65 por dois isolados heterólogos: Streptomyces albus e Actinomadura madurae. Devido à divergência entre os resultados encontrados nas provas bioquímicas, somente através do seqüenciamento se poderá obter identificação completa destes isolados.