Aplicação de painel de imunofenotipagem de linfócitos B universal no ensaio de QuantiFERON-SARS-CoV-2 para avaliação da resposta vacinal contra COVID-19

Abstract

A detecção de anticorpos ligantes ou neutralizantes é o parâmetro preferencialmente avaliado nas infecções virais. Na infecção por SARS-CoV-2, a mudança de classe e a maturação de afinidade dos anticorpos dependem da colaboração entre as células T e B, através da expressão de moléculas de ativação. Os ensaios de indução de marcadores de ativação foram padronizados para detecção rápida e acessível de ativação de linfócitos. A metodologia envolve a incubação de curta duração de células do sangue periférico total com antígenos de interesse. As células apresentadoras de antígeno (APC) processam o antígeno (Ag) e apresentam os peptídeos para os linfócitos T via moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC). O ensaio QuantiFERON SARS-CoV-2 (ensaio de liberação de IFN-g) detecta resposta dos linfócitos T específicos no contexto da infecção por SARS-CoV-2 e/ou vacinação contra COVID 19 pela produção de IFN-g frente aos peptídeos virais. Aplicamos o painel de imunofenotipagem de linfócitos B modificado do Projeto-de-Imunologia-Humana do National Health Institute (NIH-EUA) para avaliar a ativação de linfócitos B em amostras de indivíduos vacinados contra COVID-19. Amostras remanescentes do QTF-SARS-CoV-2 reagentes foram marcadas com anticorpos monoclonais (CD3/CD10/ CD19/CD20/CD24/CD27/CD38/CD40/CD69/IgD/viability), hemolisadas e avaliadas no citômetro de fluxo (Cytoflex S, Beckman Coulter); os dados foram analisados no FlowJo (BD). A análise convencional de populações positivas e negativas para cada marcador do painel (11 marcadores) resultou em no mínimo 100 subpopulações; dentre estas identificamos os linfócitos B naive, de memória, transicionais, plasmablastos que expressaram marcadores de ativação (CD69, CD40) nas condições estimuladas pelos três conjuntos de peptídeos virais (Ag1, Ag2 e Ag3) nas amostras QTF reagentes, detectada pela produção de IFNg. Concluímos que o painel de imunofenotipagem de linfócitos B universal-modificado pode ser utilizado junto ao QTF-SARS-Cov-2 para aprofundar o conhecimento da resposta de memória gerada pelos linfócitos B após vacinação contra COVID-19 em indivíduos expostos ou não ao SARS-CoV-2.