Uma nova abordagem no diagnóstico sorológico da toxoplasmose: uso das vesículas extracelulares de Toxoplasma gondii

Abstract

A toxoplasmose, causada por Toxoplasma gondii, pode causar graves complicações em fetos e indivíduos imunocomprometidos. As vesículas extracelulares (EVs) são nanopartículas relacionadas a diferentes processos biológicos como a modulação da resposta imune na relação parasita-hospedeiro. Esse estudo preliminar avaliou a capacidade das EVs liberadas por T. gondii (Toxo-EVs) de ser biomarcador para uso no diagnóstico sorológico para toxoplasmose. Inicialmente, um ELISA “in house” foi padronizado. As Toxo-EVs constituíram o antígeno. Taquizoítos da cepa RH de T. gondii foram coletados de sobrenadantes de culturas de células VERO há cerca de 2 dias pós-infecção, contados, centrifugados e lavados com PBS estéril. Para a liberação das EVs, taquizoítos foram ressuspensos em meio RPMI e incubados por 2 h a 37ºC. Após a remoção dos parasitas por centrifugação e filtração as Toxo-EVs foram tratadas com um coquetel de inibidores de protease. A seguir, as placas de ELISA foram sensibilizadas com Toxo-EVs. Após as padronizações e ate a presente data foram testados 159 soros divididos em 7 grupos: TxG, 33 soros de gestantes com toxoplasmose aguda; TxC, 35 soros de gestantes com toxoplasmose crônica; GN, 21 soros de gestantes soronegativas para toxoplasmose; RN, 14 soros de recém-nascidos gestantes do grupo TxG; TxI, 19 pacientes com toxoplasmose e imunossupressão (aids, transplantes, câncer); OD; 9 pacientes com outras doenças, CN, 28 indivíduos soronegativos para toxoplasmose, que foram utilizados para os cálculos de sensibilidade, especificidade, “cut off” e curva ROC. O desempenho da Toxo-EVs-ELISA, até a presente data, foi excelente quando comparado com o Kit EUROMMUN comercial para toxoplasmose IgG, mostrando  alta sensibilidade e especificidade. A conclusão preliminar mostra que o Toxo-EVs-ELISA testado em soros apresentou uma excelente curva ROC. Em adição, as Toxo-EVs liberadas por taquizoítos de T. gondii claramente identificam os anticorpos hospedeiros e constituem um bom biomarcador para testes sorológicos.