Avaliação da estabilidade de controles genéticos utilizados em ensaios de PCR em tempo real para identificação dos principais genogrupos de Neisseria meningitidis

Abstract

Ensaios de PCR em tempo real (qPCR) in house para identificação dos principais genogrupos de N. meningitidis (Nm) foram estabelecidos pelo Instituto Adolfo Lutz e amplamente implementados em vários laboratórios de saúde pública (LACEN) do país. Controles genéticos constituídos de plasmídeos com fragmentos dos genes alvos de Nm dos genogrupos A, B, C, W, X e Y foram produzidos para serem empregados como controles positivos dos ensaios de qPCR. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a estabilidade dos controles genéticos produzidos para monitorar a qualidade dos ensaios de qPCR realizados nos LACENs. A estabilidade dos controles foi avaliada através da medida do valor de Ct obtida nos ensaios de qPCR durante seis meses em diferentes condições de armazenamento: -20 °C, 4 °C e 22 °C. Foi ainda avaliada estabilidade dos controles estocados a -20 °C, frente a 20 ciclos consecutivos de congelamento/descongelamento. Os controles genéticos foram estáveis nas três condições testadas, apresentando coeficiente de variação (CV) entre 1,44% e 3,45%, com variação máxima de uma unidade no valor de Ct. A exceção foi o controle de NmB estocado a 4 °C que apresentou aumento no Ct a partir de três meses, resultando em CV de 13%. Após 20 ciclos de congelamento/descongelamento, todos os controles mostraram-se estáveis, apresentando CV entre 1,39% e 2,28% (NmA, Ct = 26,24 ± 0,42; NmB, Ct = 26,82 ± 0,39; NmC, Ct = 28,67 ± 0,62; NmW, Ct = 23,95 ± 0,33; NmX, Ct = 23,53 ± 0,54; NmY, Ct = 28,86 ± 0,62). Nossos resultados indicaram que os controles podem ser transportados em temperatura até 22 °C e submetidos a consecutivos ciclos de congelamento/ descongelamento sem perda de reatividade, representando uma excelente ferramenta para monitorar a qualidade dos ensaios de qPCR executados na rede de laboratórios de saúde pública do país..