Avaliação da técnica de extração automatizada de ácidos nucleicos com esferas magnéticas aplicada em insetos vetores para monitorar patógenos causadores de doenças

Abstract

A técnica de biologia molecular desempenha um papel fundamental nos laboratórios de saúde pública, oferecendo avanços significativos no diagnóstico de doenças e na prevenção e controle de epidemias. Considerando a necessidade de detecção de agentes etiológicos em diversos vetores para melhorar o conhecimento dos ciclos de transmissão local de doenças envolvendo artrópodes, o presente estudo teve como objetivo avaliar kits utilizados na extração automatizada de amostras humanas para obtenção de DNA de patógenos em diferentes vetores. Espécimes de flebotomíneos, carrapatos, pulgas e barbeiros recebidos no LACEN-RO foram utilizados nos testes. Cada amostra de insetos foi macerada em 200 μL de tampão de lise, seguido pela adição de 10 μL de proteinase K. Após centrifugação a 8.500 rpm por 5 minutos, foram retirados 200 μL do sobrenadante para extração. Foram testados três kits distintos: DNA e RNA de Patógenos (MPTA-PU16-B), DNA de Bactérias (MBXD-PU16-B), e DNA e RNA da Patógenos GOLD (MVXA-PU96 B/W) utilizando o aparelho EXTRACTA^® 32 com os respectivos programas de extração. Foram realizadas PCRs para a região do citocromo oxidase subunidade I do DNA mitocondrial e primers específicos para Rickettsia spp., Leishmania spp. e Tripanosoma cruzi. Os produtos de PCR foram analisados por eletroforese em gel de agarose, que permitiu a visualização do DNA amplificado, demonstrando a eficácia da extração de DNA nos insetos para os três kits utilizados. Os resultados obtidos indicam que os métodos avaliados são acessíveis, rápidos e eficazes para a detecção e diagnóstico de agentes patogênicos em seus vetores. Além disso, a técnica pode ser aplicada ao monitoramento do vírus Oropouche, uma arbovirose emergente na América do Sul, em seus possíveis vetores. A identificação molecular de patógenos em seus vetores é crucial para compreender sua distribuição e implementar estratégias de controle mais eficientes, prevenindo surtos e limitando a propagação de doenças.