Análise da expressão de miRNAs em esplenócitos de camundongos tratados com vesículas extracelulares de Leishmania infantum

Resumen

A leishmaniose visceral é uma doença crônica causada por Leishmania infantum no Brasil. As espécies de Leishmania possuem fatores de virulência que lhes permitem resistir à resposta dos macrófagos, desencadeando a infecção. Os parasitas liberam vesículas extracelulares (EV) para invadir as células hospedeiras. Ao mesmo tempo, as EVs modulam as citocinas e os microRNAs (miRNAs) preparando as células para a infecção. Estudos anteriores mostraram que as EVs liberadas por Leishmania (Leish-EVs) modulam a regulação e a sinalização imunológica de hospedeiros. O objetivo do presente estudo foi investigar a participação das Leish-EVs na regulação da expressão gênica de esplenócitos de camundongos. A partir de baços de três camundongos da linhagem Balb/c foram coletados esplenócitos, que foram cultivados em placas de 48 poços contendo meio de RPMI 1640, suplementado com 20% de soro fetal bovino. As placas, então, foram mantidas em estufa CO2 5%, a 37 °C por 48 horas. A seguir os esplenócitos foram tratados com Leish-EVs (20 µg), e foi incluído ao experimento um controle “branco” contendo somente o meio de cultura e outro contendo 5:1 promastigotas de L. (L.) infantum. Estes experimentos foram realizados em duplicata. Após 24 horas os sobrenadantes foram coletados e utilizados para análise da expressão gênica de quatro espécies de miRNA, por PCR em tempo real. Houve aumento da expressão gênica dos miR-21-5p e miR-146a-5p nos esplenócitos tratados com Leish-EVs. Por outro lado, os miR-125b-5p e miR-144-3p foram pouco expressos. Estes resultados sugerem que a elevada expressão dessas duas espécies de miRNA em esplenócitos de camundongos tratados com Leish-EVs causam o aumento de IL-10 (dados não mostrados). Portanto, essa via molecular pode contribuir para a imunossupressão, causando a grave imunopatologia em hospedeiros infectados.