Desafios tecnológicos encontrados na produção de anticorpos policlonais para atender as demandas do Centro de Patologia no Instituto Adolfo Lutz

Resumen

Com o surgimento de novos patógenos foram estabelecidas plataformas tecnológicas como ferramentas diagnósticas. A geração dos anticorpos policlonais específicos via imunização em animais com proteínas recombinantes veio contribuir para esclarecer a patogênese das infecções. Os Laboratórios Centrais de Saúde Pública têm como missão estratégica buscar autonomia na produção de tecnologias e insumos para atender as demandas. Com esse intuito, objetivamos produzir, identificar e caracterizar anticorpo policlonal direcionado às proteínas de interesse. Nesse contexto, integrou-se uma equipe multidisciplinar no Instituto Adolfo Lutz, que durante a pandemia da COVID-19 se empenhou no estudo e na pesquisa utilizando plataformas tecnológicas: animais de laboratório (experimentação, imunização, eutanásia e sangria); bioensaios (fases pré-analítica e analítica); biologia estrutural integrada (técnicas com proteínas recombinantes e protocolos de purificação); métodos analíticos (técnicas qualitativa “SDS-PAGE e Western blot” e quantitativa “dosagem de proteína” e “ELISA indireto”) e microscopia (análise qualitativa histopatológica), para a produção do antígeno recombinante “RBD-Domínio de Ligação do Receptor” contra SARS-CoV-2, que foi sintetizado artificialmente e expresso em vetor de células de mamífero. O plasmídeo de DNA foi amplificado em E.coli e purificado. As frações purificadas foram identificadas e quantificadas na concentração proteica 0,5 e 1 mg de plasmídeo. Essas foram administradas por via intramuscular em coelhos (Nova Zelândia) a cada 21 dias e no 84° dia realizou-se a eutanásia e a sangria total. O soro imune obtido seguiu os procedimentos das plataformas. A análise histopatológica nos tecidos baço e pulmão foi corada pela hematoxilinaeosina que demonstrou hiperplasia linfóide no baço na polpa branca e no tecido linfóide nos brônquios, caracterizando uma resposta inflamatória com infecção. No animal controle, não demonstrou coloração no centro germinativo e mínima no pulmão. Próximas etapas serão padronização e validação. Verifica-se a importância de estabelecer outras plataformas tecnológicas para o desenvolvimento de imunizantes na produção de anticorpos policlonais para atendimento dos agravos.