Keywords
femA
mecA
Staphylococcus aureus
methicillin resistance
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Abstract
This study identified Staphylococcus aureus and the methicillin-resistant (MRSA) strains in raw milk samples using molecular methods, and their minimum inhibitory concentrations (MIC) were evaluated. Two hundred fifty-one samples of raw milk samples from bulk tanks, collected in the state of Minas Gerais, Brazil were analyzed using polymerase chain reaction (PCR) to investigate the presence of femA gene in 278 S.aureus isolates. Furthermore, MRSA strains were investigated for detecting mecA gene. All of 278 isolates contained the femA gene (132 bp), and in 11 samples (3.95 %) the mecA gene (533 bp) was identified. The minimum inhibitory concentration against S. aureus was determined using enrofloxacin, trimethoprim-sulfamethoxazole, gentamicin, azithromycin, tetracycline, cephalothin, amoxicillin, penicillin G and lincomycin. Enrofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole showed to be the most effective inhibitors, as this study identified 149 of 161 isolates (92.5 % of susceptibility) with MIC≤ 4 mg/ mL, and 55 of 66 isolates (83.3 % of susceptibility) with MIC≤ 2 mg/mL, for the first antimicrobial drug and the second one, respectively.References
1. Arcuri EF, Brito MAVP, Brito JRF, Pinto SM, Ângelo FF, Souza GN. Qualidade microbiológica do leite refrigerado nas fazendas. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. 2006;58(3): 440-6.
2. Silva ER, Silva N. Coagulase gene typing of Staphylococcus aureusisolated from cows with mastitis in southeastern Brazil. Can J Vet Res. 2005;69(4): 260-4.
3. Zecconi A, Hahn G. Staphylococcus aureus in raw milk and human health risk. Bull Int Dairy Fed 2000;1(345):15-8.
4. Proft T, Fraser JD. Bacterial superantigens. Clin Exp Immunol 2003;133(1):299 – 306.
5. Phuektes P, Mansell PD, Browning GF. Multiplex polimerase chain reaction assay for simultaneous detection of Staphylococcus aureus and streptococcal causes of bovine mastitis. J Dairy Sci 2001;84(5):1140-8.
6. Silva MA. Ulilização de PCR multiplex para o diagnóstico de mastite bovina [dissertação de mestrado]. Belo Horizonte (MG):Universidade Federal de Minas Gerais;2008.
7. Costa GM.Mamite bovina em rebanhos leiteiros da região sul do Estado de Minas Gerais [tese de doutorado]. Belo Horizonte (MG):Universidade Federal de Minas Gerais;2008
8. Andrade APC. Identificação bioquímica, molecular e pesquisa de genes codificadores de enterotoxinas de Staphylococcus spp. isolados de queijo coalho [dissertação de mestrado]. Fortaleza (CE): Universidade Federal do Ceará;2009.
9. Dias NL. Identificação de Staphylococcus aureus, avaliação do seu potencial enterotoxigênico e resistência a meticilina pela técnica de PCR em amostras de leite da microrregião de Sete Lagoas-MG, 2009 [dissertação de mestrado]. Belo Horizonte (MG): Universidade Federal de Minas Gerais;2010.
10. Dias NL, Silva DCB, Oliveira DCBS. Detecção de genes de Staphylococcus aureus, enteroxinas e de resistência à meticilina em leite. Arq Bras Med Vet Zootec. 2011;63(1):1547-52.
11. Ângelo FF. Detecção de genes de exotoxinas em Staphylococcusspp. isolados de leite cru refrigerado e de leite de vacas com mastite [tese de doutorado]. Viçosa (MG): Universidade Federal de Viçosa;2010.
12. Lee JH, Jeong JM, Park YH. Evaluation of the methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)-screen latex agglutination test for detection of MRSA of animal origin. J Clin Microbiol. 2004;42(6):2780-2.
13. Sader HS, Fritsche TR, Jones RN. Antimicrobial activities of ceftaroline and ME1036 tested against clinical strains of community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 2008;52(3):1153–5.
14. Cardoso HFT, Costa GM, Silva N. Susceptibilidade a antimicrobianos de S. aureus isolados de leite bovino no Estado de Minas Gerais. Rev Bras Med Vet Zootec. 2000;22(5):199-206.
15. Brito MAVP, Brito JRF, Silva MAS. Concentração mínima inibitória de dez antimicrobianos para amostras de Staphylococcus aureus isoladas de infecção intramamária bovina. Arq Bras Med Vet Zootec. 2001;53(5):531-7.
16. Owens WE, Ray CH, Washburn PJ. Effect of selected antibiotics on Staphylococcus aureus present in milk from infected mammary glands. J Vet Med. 1993;40(7):508-14.
17. Rubin JE, Ball KR, Chirino-Trejo M. Antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus and Staphylococcus pseudintermediusisolated from various animals. Can Vet J. 2011;52(1):153–7.
18. Haran MKP, Godden SM, Boxrud D. Prevalence and characterization of Staphylococcus aureus, including Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus, isolated from bulk tank milk from Minnesota Dairy Farms. J Clin Microbiol. 2012;50(3): 688–95.
19. Salvarani FM, Pinto FF, Lobato FCF. Concentração inibitória mínima (CIM) de oito antimicrobianos frente a isolados de Streptococcus suis. Braz J Vet Res Anim Sci. 2008;45(1):41-7.
20. Neves MC, Costa JRV, Vieira VC. Resistência aos antimicrobianos e análise da diversidade genética de Staphylococcus aureus por PCR-rapd. Arq Inst Biol. 2010;77(4):575-82.
21. Kalmus P, Aasmae B, Kärssin A. Udder pathogens and their resistance to antimicrobial agents in dairy cows in Estonia. Acta Vet Scand. 2011;53(4):1-7.
Quinn PJ, Carter ME, Markey BK. Clinical veterinary microbiology. London:Wolfe; 1994.
23. Cremonesi P, Castiglioni B, Malferrari G. Technical Note: Improved for rapid DNA extraction of mastitis pathogens directly from milk. J Dairy Sci. 2006;89(1):163-9.
24. Silva ER. Genotipagem e avaliação do potencial enterotoxigênico de amostras de Staphylococcus aureus isoladas de mastite caprina e bovina [tese de doutorado]. Belo Horizonte (MG): Universidade Federal de Minas Gerais;2004.
25. CLSI-Clinical and Laboratory Standards Institute. Methodology of testing antimicrobial sensitivity by dilution for aerobic bacteria growth: norma aprovada. (Substituição da norma A5 vol. 20, n. 2). Sexta edição. M7-A6. 2003; 23(2).
26. CLSI-Clinical and Laboratory Standards Institute. Methods for dilution antimicrobial- Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 15º suplemento informativo (Substituição da norma M100-S14, vol. 24). 177 p. M100-S15. 2005; 25(1).
27. Carvalho FG. Colonização e identificação de Streptococcus grupo mutans e Candidaspp. em lesões de cárie associadas ou não a Síndrome da Cárie de mamadeira [dissertação de mestrado]. Araraquara (SP): Universidade de São Paulo;2005.
28. CLSI-Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; 20ºsuplemento (Substituição da norma M100-S19. v. 29, n. 3). 180p. M100-S20. 2010; 30(1).
29. Mehrotra M, Wang G, Johnson WM. Multiplex PCR for detection of genes for Staphylococcus aureus enterotoxins, exfoliative toxins, toxic shock syndrome toxin 1, and methicillin resistance. J Clin Microbiol. 2000;38(3):1032–5.
30. Kobayashi IN, Wu H, Kojima K. Detection of mecA, femA, and femB genes in clinical strains of staphylococci using polymerase chain reaction. Epidemiol Infect. 1994;1(113): 259-66.
31. Nihonyanagi S, Kanoh Y, Okada K, Uozumi T, Kazuyama Y, Yamaguchi T, et al. Clinical usefulness of multiplex pcr lateral flow in MRSA detection: a novel, rapid genetic testing method. Inflamm. 2012;35(3):927-34.
32. Moon JS, Lee AR, Kang HM, Lee ES, Joo YS, Park YH, et al. Antibiogram and coagulase diversity in staphylococcal enterotoxin-producing Staphylococcus aureus from bovine mastitis. J Dairy Sci. 2007;90(4):1716-24.
33. Huletsky A, Giroux R, Rossbach V, Gagnon M, Vaillancourt M, Bernier M, et al. New Real-Time PCR assay for rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus directly from specimens containing a mixture of staphylococci. J Clin Microbiol. 2004;42(5):1875–84.
34. Sturenburg E. Rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus directly from clinical samples: methods, effectiveness and cost considerations. Ger Med Sci. 2009; 7(1):1-19.
35. Gianneechini RE, Concha C, Franklin A. Antimicrobial susceptibility of udder pathogens isolated from dairy herds in the west littoral region of Uruguay. Acta Vet Scand. 2002;43(1): 31-41.
36. Zafalon LF, Arcaro JRP, Nader Filho A. Investigação de perfis de resistência aos antimicrobianos em Staphylococcus aureusisolados na ordenha de vacas em lactação. Rev Inst Adolfo Lutz. 2008;67(2):118-25.
37. Pereira-Maia EC, Silva PP, Almeida WB. Tetraciclinas e glicilciclinas: uma visão geral. Quim Nova. 2010;33(3):700-6.
38. Klein R C. Expressão de genes de virulência de Staphylococcus aureus isolados de mastite bovina em resposta à concentrações subinibitórias de antimicrobianos [dissertação de mestrado]. Viçosa (MG): Universidade Federal de Viçosa;2010.
39. Souza MV, Reis C, Pimenta FC. Revisão sobre a aquisição gradual de resistência de Staphylococcus aureus aos antimicrobianos. Rev Patol Trop. 2005;34(1):27-36.
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