OTIMIZAÇÂO NA OBTENÇÃO DE ANTÍGENO DE Histoplasma capsulatum PARA O IMUNODIAGNÓSTICO DA HISTOPLASMOSE

Abstract

O objetivo deste trabalho foi a padronização de uma preparação antigênica com as seguintes características: fácil obtenção, específica, estável e reprodutível. Células micelianas da amostra Hc200 foram cultivadas em ágar Sabouraud-dextrose durante 33 dias a 27oC, segundo Freitas (2005). Após este período, as culturas foram incubadas com solução mertiolato-borato (1:5000) por 24 horas, filtradas e concentradas 20 vezes. O perfil antigênico foi avaliado por SDS-PAGE e a especificidade do antígeno analisada por imunodifusão dupla (ID) frente a anticorpo policlonal homólogo e heterólogo; 40 amostras de soros reagentes para Hc por ID (Grupo 1); 25 soros de indivíduos com suspeita clínica de HP e não reagentes por ID (Grupo 2); 59 soros reagentes para Paracoccidioides brasiliensis por ID (Grupo 3) e 64 soros de indivíduos saudáveis (Grupo 4). A análise por SDS-PAGE revelou entre outras, a presença de frações protéicas com massa molecular entre 120-108 kDa e 97-70 kDa, correspondente às frações H e M de
H. capsulatum, respectivamente. Por ID, verificamos a formação de duas linhas de precipitação quando o antígeno foi avaliado frente ao anticorpo policlonal homólogo e ausência de reatividade frente ao anticorpo heterólogo; 77,5% de positividade para amostras do Grupo 1 e 12% para o Grupo 2; 93% de ausência de reatividade para o Grupo 3 e 100% para o Grupo 4. A metodologia proposta para obtenção de antígenos de H. capsulatum confirma ser esta uma alternativa de baixo custo operacional, de fácil exeqüibilidade técnica, necessitando de menor período de tempo para sua produção. Além disto, verificamos que o ágar Sabouraud-dextrose constituiu-se em um excelente meio para a produção de antígenos e a utilização de solução mertiolato-borato se mostrou eficiente para a extração de componentes antigênicos, abrindo assim, perspectivas para laboratórios que não possuam condições para adquirir meios de cultura complexos produzam antígenos com bom nível de especificidade.