AVALIAÇÃO DO USO DA TÉCNICA DE ANÁLISE DE FRAGMENTOS NO DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DAS MENINGITES BACTERIANAS

Abstract

O presente trabalho teve como objetivo padronizar um ensaio multiplex de análise de fragmentos para a detecção simultânea de Neisseria meningitidis (Men), Streptococcus pneumoniae (Spn), Haemophilusinfluenzae (Hi) e Staphylococcus aureus (Saur) em amostras de pacientes com quadro clínico de meningite bacteriana do município de São Paulo no período de julho a novembro de 2011. Foram analisadas 322 amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) e 182 de soro. A extração de DNA foi realizada no equipamento MagNA Pure (Roche), sendo as amostras primeiramente submetidas aos ensaios de PCR em tempo real para a detecção de Men, Spn e Hi e RNase P. O ensaio multiplex de análise de fragmentos foi realizado empregando-se 2 uL de DNA e 4 pares de iniciadores específicos para cada bactéria sendo um deles marcado com o fluoróforo FAM ou HEX. Após a corrida no termociclador, 1 uL do produto da PCR foi adicionado em 12 uL de solução contendo formamida e o marcador GeneScan 500 ROX e submetido à eletroforese capilar no sequenciador ABI 3130xl. A análise dos dados foi realizada no programa GeneMapper 4.1. Entre as amostras de LCR, 146 foram positivas para Men, 35 para Spn, 25 para Hi e 116 amostras foram negativas. Entre as amostras de soro, 76 foram positivas para Men, 15 para Spn, 3 para Hi e88 foram negativas. Não foi detectada a presença do Saur em nenhuma das amostras analisadas. A técnica de análise de fragmentos apresentou 100% de concordância com os resultados dos ensaios de PCR em tempo real. A análise de fragmentos apresentou resultados promissores constituindo-se em uma nova ferramenta para o diagnóstico laboratorial das meningites bacterianas. Uma das grandes vantagens desta técnica é a possibilidade de detectar simultaneamente quatro patógenos em uma única reação, sem perda de sensibilidade e com rapidez na liberação dos resultados.