Desenvolvimento de cinco painéis de imunofenotipagem universais modificados do Projeto de Imunologia Humano para monitorar o sistema imune

Abstract

A citometria de fluxo (CF) é poderosa para monitorar o sistema imune, mensurando múltiplos parâmetros em milhares de células individuais rapidamente. A disponibilidade de inúmeros reagentes proporciona a determinação de proteínas de superfície, intracelulares e intranucleares levando a incontáveis aplicações e metodologias. A mensuração acurada das variações do sistema imune (SI) exige ensaios precisos e padronizados de imunofenotipagem. Desenvolvemos e testamos 5 painéis de imunofenotipagem (12 cores) baseados no Consórcio Internacional de Imunofenotipagem Humano (CIIH8 cores) do Projeto de Imunologia Humana (NIAID, EUA). Foram realizadas a testagem e titulação de 11 anticorpos monoclonais conjugados a fluorocromos (AcM-F), e marcador de viabilidade (V) em células mononucleares do sangue periférico por painel (P): (P1) Células T Memória/Ativação, (P2) Fenótipo Th, (P3) T regulatória/ativação/exaustão, (P4) células B e (P5) monócitos, células NK e dendríticas. Leitura realizada no citômetro de fluxo Cytoflex S (Beckman Coulter, EUA). Os dados foram analisados no FlowJo 10.8.1 (BD, EUA). Foram testados e titulados 57 AcM-F nos cinco painéis que definiram populações marcadas e não marcadas, e os índices de marcação (IM) calculados. A concentração de anticorpo utilizada foi com maior IM. Amostras de PBMC e sangue periférico marcadas com o conjunto de AcM-F+V definiram múltiplas populações de células: (P1) T, TCD4+, TCD8+, naïve, memória central ou efetora, efetora expressando ou não marcador de ativação e exaustão; (P2) T, TCD4+, TCD8+, Th1, Th2, Th17 e T folicular ativada/exausta; (P3) T, TCD4+, TCD8+, regulatória, memória, naïve, ativada/exausta; (P4) B, CD19+ e/ou CD20+, naïve/memória, transicional, plasmablasto, ativadas; (P5) Monócitos totais, clássicos e não clássicos, 3 subpopulações de NK, células dendríticas (mielóides/plasmocitóides) ativadas/não ativadas. Os cinco painéis de imunofenotipagem desenvolvidos e testados permitem a caracterização das populações definidas pelo CII-PIH podendo ser utilizados em qualquer contexto de saúde ou patológico para monitorar o SI.