Avaliação in vitro dos mecanismos de indução de miR-144-3p e miR-125b-5p no contexto da toxoplasmose

Abstract

A toxoplasmose é considerada como uma doença de risco global, necessitando de ações e uma compreensão mais clara dos impactos na saúde animal, humana e ambiental. A investigação sobre como os microRNAs (miRNAs) influenciam a toxoplasmose pode revelar detalhes sobre a regulação da infecção, e tais descobertas são fundamentais para a utilização dessas moléculas como potenciais biomarcadores para aprimorar o diagnóstico, prognóstico e tratamento da infecção. Diante desse cenário, o objetivo desse estudo foi avaliar se a produção in vitro de miR-144-3p e miR 125b-5p envolvidos na regulação da toxoplasmose ocorre de forma direta pelo parasita ou por meio de citocinas importantes no contexto da infecção. Para os experimentos de indução de citocinas, as células THP-1 diferenciadas em macrófagos foram estimuladas com 10 ng/mL das citocinas sintéticas TNF-α, IL-10, IFN-γ e TGF-β. Na avaliação da indução por parasita, células THP-1 diferenciadas e infectadas com taquizoitos receberam 20 ng/mL de inibidor dessas citocinas. Após os períodos determinados, foram realizadas a extração do RNA total, cDNA e qPCR dessas amostras e os níveis dos miRNAs de interesse foram observados. Os valores foram expressos em quantificação relativa e calculados pelo método do CT comparativo. Verificou-se que o parasita é capaz de induzir tanto miR-144-3p quanto miR-125b-5p. Já na indução por citocinas, miR-144-3p foi induzido somente por TGF-β (média de expressão de 3,27) e miR-125b-5p por TNF-α (41,46). Sendo assim, tanto o miR 144-3p como em miR-125b-5p a indução de sua produção pode ocorrer tanto por meio de mediadores endógenos quanto de forma direta pelo parasita.