PADRONIZAÇÃO DE ENSAIO MULTIPLEX DE PCR EM TEMPO REAL PARA O DIAGNÓSTICO MOLECULAR DEPNEUMONIAS ATÍPICAS CAUSADAS POR MYCOPLASMA PNEUMONIAE, CHLAMYDIA PNEUMONIAE E LEGIONELLA PNEUMOPHILA

Resumen

As pneumonias respondem por 20% dos óbitos e 13% das internações em menores de 5 anos. Entre os principais agentes bacterianos responsáveis pelas pneumonias, destacam-se o Streptococcus pneumoniae e Haemophilus influenzae. Com o objetivo de ampliar a capacidade de detecção de microrganismos importantes nas pneumonias atípicas (PNA) causadas por Mycoplasma pneumoniae (Mpn), Chlamydiapneumoniae (Cpn) e Legionella pneumophila (Lpn), padronizamos um ensaio de PCR em tempo real (PCR-TR) no formato multiplex empregando-se o sistema TaqMan®. Foram analisadas um total de 35 amostras, sendo 22 amostras de secreções de vias respiratórias, 4 amostras de líquido pleural e 9 amostras de soro/plasma de pacientes com suspeita clínica de pneumonia bacteriana, no período de julho a agosto de2012. A extração de DNA das amostras clínicas foi realizada pelo sistema automatizado MagNAPure LC2.0 (Roche), sendo as secreções respiratórias anteriormente fluidificadas empregando-se um tratamento com ditiotreitol (DTT) 0,9%. Nossos resultados demonstraram que 2 amostras (5,7%) foram positivas para Mycoplasma pneumoniae. Este ensaio está implantado no Instituto Adolfo Lutz desde julho de 2012 e um número maior de amostras é necessário para melhor avaliação desta metodologia. No entanto, a disponibilidade deste diagnóstico para a Saúde Pública amplia a pesquisa destes agentes e contribui significativamente no pronto atendimento deste agravo, visto que a sintomatologia clínica causada por estas bactérias não apresenta uma característica específica que permita diferenciá-los de outras pneumonias. Adicionalmente, essas bactérias não são sensíveis aos antibióticos ß-lactâmicos que são frequentemente utilizados para o tratamento de infecções respiratórias. Desta forma, a identificação laboratorial é defundamental importância para direcionar um tratamento eficaz e adequado para os casos de PNA.