PADRONIZAÇÃO E IMPLANTAÇÃO DA TÉCNICA DE PCR EM TEMPO REAL PARA O DIAGNÓSTICO DA HEPATITE B

Resumen

Objetivos: Padronizar a técnica de amplificação quantitativa em tempo real do DNA do vírus da Hepatite B; comparar a técnica com métodos comerciais e implantar a técnica no laboratório de Hepatites do Centro de Virologia do Instituto Adolfo Lutz. Material e Métodos: Foram analisadas 166 amostras de soro e 179amostras de plasma de pacientes com hepatite B crônica, recebidas e estocadas no laboratório de hepatites entre 2009 e 2011. Todas as amostras foram processadas pelos testes comerciais utilizados no laboratório, AMPLICOR e TaqMan® da Roche Diagnóstica e, para construção de uma curva padrão necessária em todos os testes, foi utilizado padrão da OMS. As amostras e o padrão foram extraídos através de kit comercial e processadas pelo teste de PCR (Polymerase chain reaction) quantitativo em tempo real em um equipamento ABI 7300. Foram testados três conjuntos de “primers” e sondas e o que apresentou melhor resultado foi o escolhido para a comparação da técnica com os testes comerciais. Resultados: O conjunto de “primer” e sonda escolhido detectou DNA viral em todas as amostras testadas (carga viral e genótipos variados). Quando comparada a técnica de Real time com Amplicor o teste apresentou IC de 0,9769 e Kappa de 100%, quando comparada com a TaqMan o teste apresentou IC de 0,9601 com Kappa de 97,6%.As curvas ROC na avaliação do teste PCR em relação aos kits comerciais comprovam a acurácia da PCR, onde a área sob a curva quando comparada a Amplicor foi de 0,984 e quando comparado ao TaqMan igual 0,9688, medidas estas muito próximas de 1, condição adequada de diagnóstico do teste analisado, ou seja,100% de sensibilidade e 100% de especificidade. Conclusão: A técnica padronizada apresentou ótima sensibilidade e especificidade quando comparada com métodos comerciais, podendo ser utilizada na rotina diagnóstica do laboratório. Projeto FAPESP Nº: 09/53086-4.