Palavras-chave
N. meningitidis
N. meningitidis sorogrupo
temperatura de melting
líquido cefalorraquidiano
Como Citar
Resumo
Foram investigados os fatores que causam resultados falso-negativos (RF-N) nas reações de PCR-TR no
diagnóstico de N. meningitidis em amostras de soro e LCR. Considerando-se que a doença meningocócica deva
ser rapidamente tratada pela alta letalidade e potencial epidêmico, o RF-N no ensaio diagnóstico pode ocasionar
falhas no tratamento e/ou na contenção da doença na comunidade. Portanto, é importante elucidar os fatores
que induzem RF-N na PCR-TR. Os RF-N ocorreram em virtude de inibição, baixa quantidade de DNA-alvo
nas preparações de DNA e inadequada temperatura no procedimento de anelamento. Por ser altamente variável
a concentração de DNA bacteriano em amostras clínicas, não foi possível definir o volume ideal de amostra
a ser extraído. A temperatura a 60°C para anelamento, recomendada para genogrupagem de N. meningitidis
por PCR-TR, não foi adequada para genogrupos B e W135. Estes fatores ocasionaram a indução de RF-N em
31 amostras; consequentemente, 30% das bactérias detectadas pelo PCR-TR foram classificadas como não
genogrupáveis. Inibidores e/ou baixa quantidade de DNA-alvo induzem RF-N, independentemente do volume
de amostra utilizada na extração de DNA; entretanto, ajustes na temperatura de anelamento e na quantidade de
amostra extraída adicionada na reação podem evitar a maioria destes RF-N.
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Copyright (c) 2013 Lucila Okuyama Fukasawa, Maria Gisele Gonçalves, Fabio Takenori Higa, Maristela Marques Salgado, Ana Paula Silva de Lemos, Claudio Tavares Sacchi