Extração de DNA de biópsias de pele fixadas em formalina tamponada e embebidas em parafina e amplificação por PCR

Autores

  • Ana Carla Pereira Doutor em Ciências Farmacêuticas; Equipe de Farmacologia-Bioquímica, Instituto Lauro de Souza Lima
  • Vânia Brito de Souza Doutor em Genética e Biologia Molecular; Equipe de Imunologia, Instituto Lauro de Souza Lima
  • Ida Maria Foschiani Dias-Baptista Doutor em Biologia Celular e Molecular; Equipe de Microbiologia, Instituto Lauro de Souza Lima

DOI:

https://doi.org/10.47878/hi.2008.v33.36239

Palavras-chave:

epidemiologia molecular, banco de DNA, PCR, dermatologia, hanseníase

Resumo

Biópsias de pele oriundas dos serviços de diagnóstico da hanseníase podem ser grande fonte de material para estudos retrospectivos em genética humana e do Mycobacterium leprae. No entanto, os procedimentos de fixação e inclusão em parafina podem dificultar a obtenção de DNA de qualidade para amplificação por PCR. Assim, estas amostras requerem protocolos especiais para a extração do material genético. O objetivo deste trabalho é apresentar um método alternativo para extração de DNA com base na combinação de calor e digestão enzimática. Para tanto, os cortes foram aquecidos a 120º C em solução tampão de pH 9,0, submetidos à digestão enzimática com proteinase K e o DNA foi extraído por meio de solução de fenol:clorofórmio:álcool isoamílico. A amplificação por PCR para as regiões dos genes humanos TNF e LTA foi bem sucedida para 85,4% dos espécimes. Considerando o DNA do M. leprae, obtivemos
amplificação em 67,6%, 48,5%, 36,7% e 64,8% para os marcadores TA18, GTA9, TTC e RLEP, respectivamente.
Concluímos que este é um método de baixo custo que proporcionou um rendimento satisfatório de DNA de
boa qualidade para emprego em PCR a partir de biópsias parafinadas de pele.

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Publicado

30-11-2008

Como Citar

1.
Pereira AC, Souza VB de, Dias-Baptista IMF. Extração de DNA de biópsias de pele fixadas em formalina tamponada e embebidas em parafina e amplificação por PCR. Hansen. Int. [Internet]. 30º de novembro de 2008 [citado 29º de março de 2024];33(2):25-30. Disponível em: https://periodicos.saude.sp.gov.br/hansenologia/article/view/36239

Edição

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Nota técnica